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鸡法氏囊病病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

鸡法氏囊病病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
【产品名称】
     通用名称:鸡法氏囊病病毒抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
     英文名称:Diagnostic Kit for the Determination Chicken Infectious Bursul Disease Virus Antibody (ELISA)
【预期用途】

 

检验原理
微孔上包被的鸡法氏囊病病毒抗原,可与待测样品中特异性抗体(抗-IBD)反应,形成抗原-抗体复合物被吸附到固相上,再加入酶标记的抗鸡IgG,则形成“固相鸡法氏囊病病毒抗原-鸡法氏囊病病毒抗体-抗鸡抗体-HRP”免疫复合物,洗涤后,如待测样品中含有鸡法氏囊病病毒抗体,加入显色剂即显色,为阳性,反之为阴性。
主要组成成分
序号 组分名称 数量 序号 组分名称 数量
1 包被反应板 96T×2包 7 显色剂B 11ml×1瓶
2 阴性对照 1ml×1瓶 8 终止液 11ml×1瓶
3 阳性对照 1ml×1瓶 9 洗液(20×) 50ml×1瓶
4 样品稀释液 21ml×1瓶 10 说明书 1份
5 酶标记结合物 21ml×1瓶 11 自封袋 2个
6 显色剂A 11ml×1瓶 12 封板膜 6张
 
检验方法
1. 配洗液:将50ml洗液(20×)加纯化水稀释至1000ml,充分摇匀后备用。
2. 编号:每次试验应在包被板上设空白对照孔1孔,阴性对照孔2孔,阳性对照孔2孔,其余为待检样品孔。
3. 加样品稀释液:用加样器在包被板的待检样品孔中加入样品稀释液,每孔100μl;空白对照孔、阴性对照孔及阳性对照孔不加样品稀释液。
4. 加样:分别于各待检样品孔加入待检样品10μl,阴性对照孔加入阴性对照血清100μl,阳性对照孔加入阳性对照血清100μl;空白对照孔不加样。
5. 温育(一):充分混匀,贴上封板膜,37±2℃温育30分钟。
6. 洗板(一):洗板机洗或手洗,方法如下:
① 手洗:倾去内容物,用洗液注满反应孔,静置15秒至30秒后吸去或弃去,在毛巾或吸水纸上拍干。如此洗板重复5次。
② 洗板机洗:洗板次数为5次,每次洗液在孔中滞留时间为15-30秒,洗液应注满反应孔,确保每次吸净无残留,全部洗完后在毛巾或吸水纸上拍干。
7. 加酶标结合物:除空白对照孔以外,各孔中加入酶标结合物100μl。
8. 温育(二):贴上封板膜,37±2℃温育30分钟。
9. 洗板(二):方法同洗板(一)。
10. 加显色剂:每孔加入显色剂A 50μl,全部加完后再在每孔中加入显色剂B 50μl,混匀。
11. 温育(三): 37±2℃显色10分钟。
12. 终止: 显色完毕后立即于每孔加50μl终止液,混匀。
13. 测定: 终止后应在10分钟内完成判读。对空白对照调零,用酶标仪在450nm波长处测定吸光值。或使用双波长测定吸光值,测定波长为450nm,参考波长可选630nm或655nm。
检验结果的解释
1. 试剂盒Cut Off值=0.1+阴性对照OD平均值(若阴性对照OD平均值≥0.05则按实际值计算;若阴性对照OD平均值<0.05则按0.05计算)。
2. 若待检样品OD值<Cut Off值,结果判阴性。
3. 若待检样品OD值≥Cut Off值,结果判阳性。
试剂盒性能指标
指标项目 双波长测定(测定波长:450nm;参考波长:630nm或655nm) 单波长测定(测定波长:450nm)
空白对照孔OD值 ≤0.05 ≤0.15
阴性对照孔OD值 ≤0.15 ≤0.25
阳性对照孔OD值 ≥0.6 ≥0.7
注:使用单波长测定时,各孔OD值应先减去空白对照孔OD值,再进行结果分析。
如未达到以上指标,试验无效需重做。
注意事项
1. 本试剂盒仅适用于对鸡血清或血浆的检测,不能用于其他禽类样品的检测。所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
2. 试剂盒保存于2-8℃,使用前整套试剂应平衡至室温。
3. 试剂开封后如未用完,板条应和干燥剂一起放入自封袋内密封2-8℃保存,其它液体组份使用后瓶盖应拧紧置2-8℃保存。
4. 检测时必须设置空白对照(只加显色剂和终止液,不加酶标结合物),并在结果分析时,单波长测定应扣除空白值,双波长测定不应扣除空白值。
5. 注意控制反应时间,温育30分钟应控制在30±2分钟内,温育10分钟应控制在10±1分钟内,避免因反应时间缩短或延长而造成整体显色降低或升高。
6. 试剂过期不得使用,不同批号的试剂盒中的组份不得混用,封板膜不得重复使用,试剂瓶盖切勿交叉使用。

 


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